常規(guī)的質粒抽提試劑盒并不適用于BAC/PAC/P1等大型質粒DNA的抽提。這主要是因為大型質粒DNA分子量很大,常常會 超過100kb。使用常規(guī)的抽提試劑盒不但產量低而且會打斷這些大分子量的質粒DNA。該試劑盒將采用經典堿裂解法和硅膠 柱純化技術,硅膠柱在獨特的結合緩沖液中能高效地回收大片段質粒DNA的同時,減少質粒斷裂的可能性。
大提試劑盒適合于從50-250ml細菌培養(yǎng)液中純化大分子量的質粒載體,或各種BAC,PAC,粘粒,Cosmid等載體。 純化的質??芍苯佑糜诖笃螠y序,酶切,PCR,文庫制備等應用。細菌收集后,加入Buffer T1/T2裂解,再加入Buffer T3離心沉淀去除蛋白質和染色體DNA,在得到的上清液中加入獨特的結合液并轉移至結合柱進一步去除蛋白質,經過簡單的兩次洗滌即可得到高純度的BAC/PAC/P1等大片段質粒DNA。